基因毒杂质
使用色谱柱切换阀解决分离度差及干扰问题
有的高效液相色谱仪会在柱温箱中安装一个快速切换阀,可并联、串联多根色谱柱,通过阀通道之间的切换可快速切换色谱柱,无需拆换色谱柱,极大的增加了分析的灵活性,并能大大提高分析方法开发效率。
除了提高效率外,还可以利用阀切换色谱柱功能解决一些分离度差并有干扰的问题。在分析过程中,有时候我们会面临这样的烦恼,使用色谱柱A对两个或多个目标峰进行分离,其他峰无干扰,但是分离度差或者目标峰完全重合;使用色谱柱B几个目标峰可以有效分离,但其他峰对几个目标峰又有干扰。这种情况常见于目标峰结构相似(如异构体)但杂峰较多的样品中,因此不管是单用色谱柱A或单用色谱柱B均无法得到分离度好又无干扰的结果。此时可用阀切换色谱柱的功能解决这个问题。

图1 阀切换演示
如图1所示,将色谱柱A接入主通路中(切换阀前),色谱柱B和色谱柱C(一般为两通)分别接在两个通路上(分析过程中两个通路只会运行其中一个);
首先阀切换到主通路-通路2-主通路的线路上,当样品经过色谱柱A时,在目标物即将在色谱柱A中洗脱之前将阀切换到主通路-通路1-主通路的线路上(注意勿将杂峰切入到通路1中),待目标物完全从色谱柱A洗脱进入色谱柱B中后,再迅速切换到主通路-通路2-主通路的线路上,此时目标物全部暂存于色谱柱B中(可提前在通路2预运行一针确认目标物出峰时间区间,如目标物出峰时间为5至8分钟,那么切换到通路1和通路2的时间就为5分钟和8分钟的时间点);
其他干扰峰及杂质可在主通路-通路2-主通路的线路中完全洗脱,最后再阀切换到主通路-通路1-主通路的线路中进行分析,即可得到完全排除了干扰峰后只有目标物在色谱柱B上分离的色谱图。

图2 典型分离图谱
如图2所示,A图为单个色谱柱分析谱图(绿色图谱1、2、3三个峰为目标峰的定位图谱),杂质1、3均有明显干扰,通过各种手段都无法排除干扰,B图为通过阀切换色谱柱分析后的图谱(26`30min的三个峰为目标峰),图中的目标峰均已完全分离,且没有受到任何干扰,达到理想的分销效果,且可以通过外标法准确计算杂质的含量,提高了样品检测的准确性及灵敏度;这种方法为液相方法开发提供了一个思路。