典型案例一：基因毒

● 项目名称

山东省某中型药企左卡尼汀品种中的4-氯3-羟基丁酸的含量研究

● 项目难点

待测杂质和主成分的结构相似，容易产生相同质荷比的碎片离子，基质干扰严重，并且质谱响应很低。(其他CRO未完成的研究)

名称	结构式
4-氯3-羟基丁酸
左卡尼汀

● 解决途径及效果

尝试气质与液质等多种方法，通过调整质谱参数并挑选特殊色谱柱，提高质谱相应，实现待测物质与主成分的分离，顺利获得目标质荷比。比较了不同工艺样品中杂质含量，为后期客户优化工艺，提供了方向。

典型案例二：基因毒（同分异构体）

● 项目名称

山东省某中型药企泊沙康唑起始物料中的两种同分异构体(邻氯苯胺和间氯苯胺、邻氯硝基苯和间氯硝基苯)的含量研究

● 项目难点

（1）互为同分异构体，理化性质接近，较难分离，还需考察对位杂质的干扰。

（2）为发补项目，时间紧，合同周期仅12天。

● 解决途径及效果

通过采用不同的仪器检测手段，调整流动相、稀释剂、挑选合适的色谱柱，实现同分异构体杂质、干扰杂质的基线分离。在时间紧的情况下，仍提前完成任务(7天发送报告)，协助客户顺利完成发补。

典型案例三：基因毒

● 项目名称

山东省某大型药企头孢呋辛酯中1-溴乙基乙酸酯和异氰酸氯磺酰酯的方法研究

● 项目难点

（1）待测杂质性质极其活泼，极易与水、醇、酮等发生反应。

（2）待测杂质和主成分结构类似，且主成分受热生成与待测杂质结构类似的物质，导致回收率高。

（3）限度低，灵敏度要求高。

● 解决途径及效果

尝试不同检测方式和衍生方式，顺利开发两种方法，专属性、线性、回收率、稳定性均良好，且响应高，灵敏度可达0.5 ng/ml。

典型案例四：NDMA气质

● 项目名称

山东省某大型药企泊沙康唑中N-亚硝胺二甲胺(NDMA)和N-亚硝胺二乙胺(NDEA)的方法研究

● 项目难点

（1）待测供试品不易溶于水，导致检测限度难达到。

（2）NDEA限度低，对仪器灵敏度要求高。

● 解决途径及效果

（1）选用合适溶剂溶解供试品。

（2）改变进样参数设置，增加进样体积，响应提高，灵敏度可达0.1 ng/ml。

典型案例五：NDMA液质

● 项目名称

山东省某大型药企盐酸二甲双胍缓释片中N-亚硝胺二甲胺(NDMA)的方法研究

● 项目难点

（1）制剂中一种辅料微溶于现有的预处理方法中的提取溶剂，导致进样后严重污染仪器。

（2）NDMA限度低，对仪器灵敏度要求高。

● 解决途径及效果

（1）通过文献查阅及试验找出是哪种辅料对方法有影响，调整提取溶剂，解决污染问题

（2）根据仪器特性，调整电压、源温度，气流量等参数，提高灵敏度。

典型案例六：基因毒

● 项目名称

山东省某药物研发公司：美阿沙坦钾中8种亚硝胺（NDMA、NDEA、NDIPA、NEIPA、NDBA、NDPA、NMPA、NMBA）基因毒杂质研究

● 项目难点

（1）亚硝胺种类多、限度低、杂质响应大小不一，响应低的难以达到灵敏度要求。

（2）个别亚硝胺杂质受主成分干扰，影响杂质出峰和回收率。

● 解决途径及效果

（1）采用GC-MS/MS检测七种亚硝胺，采用液液萃取的供试品处理方式排除供试品对杂质的干扰，通过优化进样口温度、色谱柱初始温度、高压进样方式、色谱柱流量等参数极大提高了各杂质的响应，灵敏度最低可做到0.3~0.5ng/ml。

（2）采用LC-MS/MS检测NMBA，由于NMBA不易挥发无法使用气质检测，故采用液质检测。通过选择一种合适的溶解供试品的溶剂避免了溶剂对NMBA的影响（如碱会与NMBA发生中和反应），方法灵敏度可达到0.12ng/ml，线性、灵敏度和准确度良好。

典型案例七：基因毒

● 项目名称

山东省某药企富马酸伏诺拉生中19种基因毒杂质

● 杂质种类

● 项目难点

（1）杂质种类多，性质不统一，需要分成多个方法进行。

（2）含有多种同分异构体杂质，性质接近，分子量相同，较难分离，易干扰彼此检测。

（3）部分杂质与主成分有类似结构，在质谱中容易裂成相同的碎片，导致待测杂质受主成分的干扰。

（4）部分杂质性质极其活泼，易与水、醇、酮等发生反应，无法直接测定。

（5）部分杂质出峰与主成分出峰时间接近，切阀后主成分容易进入质谱导致基线升高，待测杂质响应降低、回收率不达标。

● 解决途径及效果

（1）根据各杂质的结构、理化性质如溶解性、沸点等及限度要求选择相应的分析方法，如挥发性的选用气相或气质、不挥发的选用液相、液质，最终用9种分析方法完成了19个杂质的方法开发、验证。方法灵敏度高，检测限最低可做到0.2ng/ml。各杂质线性良好，回收率均在80%~120%范围内。

（2）对于较难分离的同分异构体通过调整流动相组分和比例、改变稀释剂、挑选合适的色谱柱等手段，实现分离并排除干扰。

（3）对于性质活泼的酰氯类杂质通过与醇衍生成酯类化合物，然后与其他酯类杂质一起检测，衍生后的化合物其灵敏度较高，稳定性良好。

（4）对于易受主成分干扰的杂质，通过萃取、溶解后再析出等方式将主成分除去，排除主成分的干扰；或者通过选择特殊的色谱柱、调节流动相的pH、选择不同酸碱度的溶剂等方式将主成分和杂质更好地分离，然后再通过设置切阀时间将主成分切入废液以避免主成分干扰。

典型案例八：基因毒杂质

● 项目名称

江苏省某药企：奈玛特韦中4-二甲氨基吡啶（DMAP）、2-羟基吡啶-N-氮氧化物（HOPO）、1-乙基-2-（3-二甲胺丙基）碳二亚胺盐酸盐（EDCI）3种基因毒杂质研究

● 杂质结构式

● 项目难点

（1）HOPO和DMAP有类似的结构碎片吡啶，容易彼此干扰。

（2）个别杂质受供试品中主成分或其他辅料成分的干扰，在杂质出峰处基线上升影响杂质，进而影响回收率。

● 解决途径及效果

（1）选用合适溶剂先溶解供试品，然后再选择合适的溶剂采用萃取的方式将供试品和杂质分开，排除供试品的干扰。

（2）有相同碎片离子的杂质分别采用不同的仪器（质谱和色谱）进行检测，避免干扰。

典型案例九：基因毒杂质

● 项目名称

山东省某大型药企：罗替高汀中对甲苯磺酸甲酯、对甲苯磺酸乙酯、对甲苯磺酰氯、2-（噻吩-2-基）乙基对甲苯磺酸酯和对甲苯磺酸5种基因毒杂质研究。

● 杂质结构式

● 项目难点

（1）杂质种类多、结构类似、性质不稳定，彼此易干扰。

（2）酰氯类杂质性质活泼、不稳定，易与水、醇等发生反应，无法直接测定。

（3）对甲苯磺酰氯与水反应生成对甲苯磺酸，易干扰对甲苯磺酸杂质的检测。

● 解决途径及效果

（1）5个杂质分2套方法进行，避免了部分杂质的互相干扰。

（2）将对甲苯磺酰氯衍生成对甲苯磺酸酯类，与其余3种对甲苯磺酸酯同时测定。通过选择色谱柱、调整流动相洗脱程序等参数将4种磺酸酯类杂质分离，方法灵敏度好、专属性高，检测限可做到限度的10%以下。

（3）将对甲苯磺酸杂质单独检测，避免了磺酰氯杂质对其干扰。同时通过筛选色谱柱、调整流动相中缓冲盐的浓度，延迟杂质出峰时间，避免了杂质不保留的情况，同时延长了溶液稳定性维持时间。

典型案例十：强基质干扰下的基因毒性杂质研究

● 项目名称

宁夏某中型药企红霉素品种中的NDMA和NDEA的含量研究

● 项目难点

NDMA和NDEA限度较低，对仪器灵敏度要求较高。供试品红霉素为大环内酯类抗生素，与杂质极性相似，溶解行为极为相似，均易溶于甲醇、二氯甲烷等有机溶剂，且浓度较大，需经过合适的前处理再进样检测，否则干扰检测、污染仪器，还需满足加标回收要求。

● 解决途径及效果

首先将仪器灵敏度调整到最佳状态，优化色谱条件。采用特殊样品制备方式，有效分离了NDMA、NDEA和红霉素，排除了样品干扰，解决了样品处理及加标回收的难点问题。

典型案例十一：嘌呤类亚硝化物杂质研究

● 项目名称

湖北及江西两个中性药企鸟嘌呤和鸟嘌呤三氨衍生物中的嘌呤类亚硝化物方法研究

● 项目难点

（1）限度低至0.375ppm。

（2）杂质与主成分色谱分离困难。

（3）主成分和杂质在各种溶剂中溶解度极低，可供选择的溶剂有限。

（4）基质干扰，回收率偏低。

（5）样品稳定性差，容易降解，使杂质含量升高。

● 解决途径及效果

优化色谱条件实现有效分离；优化质谱条件，提高杂质响应；尝试多种样品前处理流程，解决回收率和稳定性难题。

典型案例十二：羟基川穹嗪氮氧化物杂质标准品制备

● 项目名称

河南省某知名药企磷酸川芎嗪质量研究

● 项目难点

（1）常规合成方法较难，尝试了多个条件都未得到目标物。

（2）采取强制降解，随着样品破坏时间延长目标物也会降解掉。

（3）最终确定目标物在3%-5%时破坏最佳条件。

● 解决途径及效果

合成实验尝试四个条件不成，然后采用催化剂催化，实验6个温度条件下，双氧水破坏实验，目标物最高5%，然后用高压制备液相的方法制备纯化。

典型案例十三：他达拉非片碱破坏杂质

● 项目名称

山东省某知名药企他达拉非杂质制备

● 项目难点

（1）项目时间紧。

（2）破坏样品目标物含量1%，含量少，制备困难。

（3）由于辅料原因制剂样品破坏完后，过滤困难。

● 解决途径及效果

样品前处理后，溶液浑浊，直接过滤，很快就把滤膜糊住，增加离心，取上清液，再通过滤膜过滤，才解决了前处理问题，进样时样品不析出；目标物含量较少，由于时间紧迫需要增大进样量进行制备。

典型案例十四：元素杂质

● 项目名称

某大型药企某大容量注射液中元素杂质的分析方法研究

● 项目难点

（1）大容量注射液日用量按2L计，目标元素的限度较低。

（2）注射液中含盐量、含碳量较高，样品基质效应高，样品需稀释，导致上机目标元素限度更低。

（3）调节仪器稀释倍数，会使得目标元素响应降低，在该水平上，少许波动都会对数值产生较大影响。

● 解决途径及效果

（1）尽量减小样品的稀释倍数，通过调整仪器参数，减少样品基质效应。

（2）优化样品前处理流程，提高检测灵敏度。